革兰染色结晶紫的作用
脱色。
乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节:脱色不充分,阴性菌被误染为阳性菌;过度脱色,阳性菌被误染为阴性菌。
因此,脱色时间一般为20-30s。革兰氏染色是细菌学中广泛应用的一种重要的差异染色方法,属于双重染色法。
这种染色方法是丹麦医生格拉姆于1884年发明的。最初用于区分肺炎球菌和肺炎克雷伯菌。革兰氏染色法一般包括四个步骤:一次染色、媒染、脱色和二次染色。
染色原理:经过初染和媒染后,细胞内形成不溶于水的结晶紫-碘大分子复合物。
革兰氏阳性菌细胞壁厚,肽聚糖含量高,分子交联紧密,因此当用乙醇洗脱时,肽聚糖的网孔会因脱水而明显收缩,并且它基本上不含脂质,因此乙醇处理不能溶解壁中的缝隙。
因此,结晶紫和碘的复合物仍然被牢牢地阻挡在细胞壁中,使其呈现紫色。革兰氏阴性菌因其壁薄、肽聚糖含量低、交联疏松,遇到乙醇后不容易收缩肽聚糖的网眼,又因其脂质含量高,当乙醇溶解脂质时,细胞壁上会有很大的空隙,复合物很容易溶出细胞壁,因此细胞被乙醇脱色后会变成无色。
此时,革兰氏阴性菌将获得新的颜色-红色,而革兰氏阳性菌仍将是紫色。
革兰氏染色的结晶紫怎么配
用脱色剂脱色时,不易去除紫色。因此,在用革兰氏染色法对某些细菌进行染色时,如果细菌能与结晶紫紧密结合,就可以省去媒染的步骤。
革兰氏染色是一种双重染色法,即标本固定后,先用龙胆紫染色,加碘溶液后用酒精脱色,再用稀释红染色。染色后的细菌可分为两类,即不被酒精脱色但保留紫色的革兰氏阳性菌(G+)。
革兰氏染色中结晶紫染色的时间是
结晶紫染色液是组织或细胞染色的常用染色液,可将细胞核染成深紫色。用于革兰氏染色。结晶紫是一种碱性染料,能与细胞核中的DNA结合产生核染色。
革兰染色紫色
革兰氏染色原理:简单来说,用结晶紫初染和碘溶液媒染后,在细菌细胞壁中形成不溶于水的结晶紫和碘的复合物,然后用95%乙醇脱色。
具体地说,在用碘溶液对结晶紫进行初步染色和媒染后,在细胞壁中形成了不溶于水的结晶紫-碘复合物。革兰氏阳性菌因其细胞壁厚、肽聚糖网络多层且交联密集,被乙醇脱色,但网眼因失水而缩小。此外,它不含脂质,因此在乙醇处理中没有间隙,因此结晶紫-碘复合物可以牢固地留在壁中,使其仍然呈紫色。然而,革兰氏阴性菌细胞壁薄,外膜脂质含量高,肽聚糖层薄,交联度差。遇到脱色剂后,脂质外膜迅速溶解,薄而疏松的肽聚糖网不能阻止结晶紫与碘的复合物的溶解,因此用乙醇脱色后仍保持无色,然后用沙黄等红色染料染色,使革兰氏阴性菌变红。
g-细菌:细胞壁较厚,肽聚糖网状分子形成渗透性屏障。当乙醇脱色时,肽聚糖脱水,毛孔收缩,因此结晶紫-碘复合物保留在细胞膜上。它是紫色的。
细菌:肽聚糖层薄,交联松散。用乙醇脱色不能收缩其结构,脂肪含量高。酒精会溶解脂肪,间隙就会变大。结晶紫-碘络合物从细胞壁中溶解出来,藏红花染料溶液在重新染色后变红。
革兰氏染色结晶紫怎么配
常用的细胞染色方法有:
1、简单染色法,常用亚甲蓝等碱性染料进行简单染色;
2.革兰氏染色法,主要包括结晶紫初染、碘溶液媒染、乙醇(或丙酮)脱色和藏红花二次染色四个过程;
3.瑞氏染色法,瑞氏染色溶剂主要由曙红亚甲蓝组成;
4.吉姆萨染色法。吉姆萨染色法的原理和结果与里特染色法基本相同。
5.细胞免疫荧光染色。免疫荧光染色的主要原理是利用抗原和抗体之间的特异性结合。
染色是生物显微镜载玻片制备中最重要的步骤之一。首先,破坏细胞膜的选择性通透性,然后使用染料,将生物组织浸入染料中,使组织细胞的一部分被染成与其他部分不同的颜色或不同深度的颜色,从而产生不同的折射率以进行观察。
此外,银染也是常用的方法。当组织块浸入硝酸银溶液中时,某些组织结构可直接还原硝酸银并使银颗粒附着其上,呈棕黑色或棕黄色。有些结构本身对硝酸银没有直接还原能力,如果加入还原剂,硝酸银可以被还原沉淀而显色。
革兰染色结晶紫浓度
革兰氏染色是细菌学中广泛应用的一种重要的差异染色方法,属于双重染色法。
这种染色方法是丹麦医生格拉姆于1884年发明的。最初用于区分肺炎球菌和肺炎克雷伯菌。革兰氏染色法一般包括四个步骤:一次染色、媒染、脱色和二次染色。未染色的细菌在显微镜下很难区分,因为它们与周围环境的折射率差异很小。
革兰氏染色中结晶紫溶液是起什么作用的溶液
革兰氏染色是细菌学中广泛使用的一种差异染色方法,由丹麦医生革兰氏于1884年创立。未染色的细菌极难在显微镜下观察到,因为它们与周围环境的折射率差异很小。染色后的细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列和一些结构特征,以进行分类和鉴定。
结晶紫初染和碘溶液媒染后,细胞壁中形成不溶于水的结晶紫-碘复合物。由于其细胞壁厚、多层肽聚糖网络和密集的交联,革兰氏阳性菌在用乙醇或丙酮脱色时,网眼因失水而减少,并且不含脂质,因此在乙醇处理中没有间隙,因此结晶紫-碘复合物可以牢固地留在壁中,使其仍然呈紫色。然而,革兰氏阴性菌细胞壁薄,外膜脂质含量高,肽聚糖层薄,交联度差。遇到脱色剂后,脂质外膜迅速溶解,薄而疏松的肽聚糖网不能阻止结晶紫与碘的复合物的溶解,因此用乙醇脱色后仍保持无色,然后用沙黄等红色染料染色,使革兰氏阴性菌变红。
革兰染色中结晶紫溶液起什么作用
单一染色法:用染色剂对涂片进行染色简单易行,适用于观察微生物的形态。用两种或两种以上染料染色的方法称为双重染色或差异染色。革兰氏染色和抗酸染色是常用的染色方法。
革兰氏染色结晶紫作用
革兰氏染色法的原理是革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的化学和生理特性有很大差异,染色体反应也不同。通常,革兰氏阳性菌与碘和结晶紫的复合物的结合相对牢固且难以脱色,而革兰氏阳性菌的结合相对较弱且易于脱色。通过这种染色方法可以区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰染色法染成紫色的是
一、常用的染色方法有革兰氏染色(最基本的)、孢子染色、荚膜染色、鞭毛染色等。2.1革兰氏染色法(1)涂抹含金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液,干燥并固定;(2)染色:用结晶紫染料溶液染色1分钟,然后用水漂洗;卢戈碘溶液染色1分钟并用水洗涤;用0.4%紫红色酒精溶液染色30s,然后用水冲洗;(3)印迹后的显微镜检查【2】。1.2抗酸染色法(1)取结核分枝杆菌阳性的痰标本(已处理),涂片、干燥并固定。(2)染色:将石炭酸品红染料溶液在沸水中浸泡10分钟,加入2 ~ 3滴覆盖菌膜染色5分钟,用水漂洗,用3%盐酸酒精脱色30秒,再用水漂洗;碱性亚甲蓝复染30秒并用水洗涤。(3)印迹后的显微镜检查【3】。1.3胶囊染色法(1)取接种肺炎球菌死亡小鼠的腹腔液,涂片、干燥、固定;(2)染色:用石炭酸品红染料溶液染色1分钟,然后用水漂洗;用95%的酒精脱色5s并用水洗涤;20%单宁酸溶液媒染10分钟,水洗;用0.8%孔雀石绿溶液染色1分钟,然后用水冲洗;(3)印迹后的显微镜检查【4】。1.4芽胞染色法(1)取等量破伤风杆菌厌氧培养液和5%孔雀石绿水溶液,放入小试管中充分混合,沸水浴20分钟;涂抹混合溶液,干燥并固定;(2)用1%的沙黄溶液染色10分钟,并用水清洗;(3)干燥后显微镜检查。2.1革兰氏染色显微镜下,金黄色葡萄球菌呈紫色球形,为革兰氏阳性菌。大肠杆菌为红色杆状革兰氏阴性菌。革兰氏染色是细菌学中最经典和应用最广泛的染色方法之一。脱色是影响革兰氏染色的关键步骤,脱色时间的长短直接关系到染色结果的准确性【5】。如果脱色过度,革兰氏阳性菌可能被误染为革兰氏阴性菌,如果脱色不足,革兰氏阴性菌可能被误染为革兰氏阳性菌,学生很难掌握。现在,将原来的四步染色法改为三步染色法,即将第三步酒精脱色和第四步红色复染合二为一,使用0.4%红色复醇溶液作为复染剂,可以达到脱色和复染的双重目的。这样,学生可以避免四步法中因脱色时间不易掌握而导致染色失败,减少重复性实验,提高教学效果。2.2抗酸染色显微镜下,结核分枝杆菌被染成红色,为抗酸菌。背景和其他细菌被染成蓝色,是非抗酸细菌。传统方法是将石炭酸品红染料溶液滴在涂片上,用载玻片夹住涂片使烟叶微热,保持染料溶液蒸5分钟左右。这种方法容易使学生将染料溶液蒸发或使染料溶液沸腾,从而影响染色效果并污染环境。改进后的方法是直接加热染液,水浴后使用,克服了上述缺点,染色效果良好。适合实验教学。2.3荚膜染色显微镜下,肺炎球菌被染成红色(成对排列),荚膜被染成绿色并存在于细菌周围。传统的胶囊染色是用结晶紫染料溶液。细菌被染成紫色,胶囊被染成淡紫色或无色。细菌和胶囊之间的差异很小,很难区分。改进后,增加了脱色、媒染和双重染色的步骤,增加了细菌和胶囊之间的对比度,易于观察,可用于学生实验和教学影片的制作。2.4孢子染色显微镜下,破伤风杆菌细胞被染成红色,孢子被染成绿色。传统的方法是将石炭酸品红染料溶液滴在涂片上,用小火加热,使染料溶液蒸5分钟左右。这种方法染液用量大,容易污染衣物和实验平台。目前改为菌液和染液混合水浴初染,然后涂片制备、固定和二次染色,节省时间,染液消耗少,细菌和孢子对比鲜明。这种方法适用于制作教学标本。3.简单染色是一种用单一染料对细菌进行染色的方法。操作步骤1。涂抹:少量细菌经燃烧、灭菌、冷却后被接种环拾取,与水滴混合形成极薄的薄膜。2.干燥:可以自然干燥,也可以将涂抹物放在火焰的高度进行微热干燥,但不能直接在火焰上烘烤。3.固定:握住载玻片的一端,使有生物膜的一面朝上,快速通过火焰2-3次(以用手指触摸涂片的反面为宜,不要烫伤手)。4.染色:加入适量结晶紫染料溶液(或石炭酸品红溶液)染色1 ~ 2分钟。5.水洗:使用自洗,直到流动的水中没有染色液的颜色。6.烘干7。金相试验