rnai干扰载体的作用(RNA干扰作用)

rnai干扰载体的作用(RNA干扰作用)

baike
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RNA干扰作用

在脱氧核糖核酸和核糖核酸中,起匹配作用的部分是含氮碱基。五个碱基都是杂环化合物,氮原子位于环或取代氨基上,其中一些(取代氨基、嘌呤环1位氮和嘧啶环3位氮)直接参与碱基配对。

有五种碱基:胞嘧啶(缩写为C)、鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T,DNA特异性)和尿嘧啶(U,RNA特异性)。顾名思义,在五种碱基中,腺嘌呤和鸟嘌呤属于嘌呤家族(缩写为R),它们具有双环结构。胞嘧啶、尿嘧啶和胸腺嘧啶属于嘧啶家族(Y),它们的环系统是六元杂环。在RNA中,尿嘧啶取代了胸腺嘧啶。值得注意的是,胸腺嘧啶比尿嘧啶多一个5-甲基基团,这增加了遗传的准确性。

通过共价键将碱基与核糖或脱氧核糖的1个碳原子连接起来形成的化合物称为核苷。核苷与磷酸结合形成核苷酸,磷酸基团连接在五糖的第五个碳原子上。

碱基:腺嘌呤-胸腺嘧啶-尿嘧啶-鸟嘌呤-胞嘧啶-嘌呤-嘧啶

核苷:腺苷-尿苷-鸟苷-胞苷-脱氧腺苷-胸苷-脱氧鸟苷-脱氧胞苷。

核糖核苷酸:amp-UMP-GMP-CMP-ADP-UDP-GDP-CDP-ATP-UTP-GTP-CTP-camp-CGMP。

脱氧核苷酸:dam-dtmp-dump-dgmp-dcmp-dadp-dtdp-dudp-dgdp-dcdp-datp-dttp-Dutp-dgtp-dctp。

核酸:DNA-RNA-LNA-PNA-mRNA-NC RNA-mirna-rrna-shrna-SiRNA-trna-mtdna-寡核酸。

核糖核酸(缩写为RNA)是生物细胞和一些病毒和类病毒中遗传信息的载体。

RNA是由核糖核苷酸与磷酸键缩合而成的链状分子。核糖核苷酸分子由磷酸、核糖和碱基组成。RNA有四种主要碱基,即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶和U尿嘧啶。其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T胸腺嘧啶,成为RNA的特征碱基。

与DNA不同的是,RNA一般是单链分子,不会形成双螺旋结构,但许多RNA也需要通过碱基配对的原理形成一定的二级结构甚至三级结构才能发挥其生物学功能。RNA的碱基配对规则与DNA基本相同,但除了A-U和G-C配对外,G-U也可以配对。

在细胞中,根据结构和功能的不同,RNA主要分为三类,即tRNA(转运RNA)、rRNA(核糖体RNA)和mRNA(信使RNA)。MRNA是合成蛋白质的模板,其内容是根据细胞核中的DNA转录的。TRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别器和氨基酸的转运体。RRNA是核糖体的组成部分,也是蛋白质合成的场所。

就病毒而言,许多病毒仅使用RNA作为其唯一的遗传信息载体(不像细胞生物一般使用双链DNA作为载体)。

自1982年以来,研究表明许多RNA如I型和II型内含子、RNase P、HDV、核糖体大亚基RNA等具有催化生化反应的活性,即具有酶的活性,这种活性被称为核酶。

20世纪90年代以来,陆续发现了RNAi(RNA interference)等现象,证明RNA在基因表达调控中发挥着重要作用。

RNa干扰

首先,基因工程的过程是有限的。目标基因必须与载体结合(载体是双链DNA),并且在导入受体细胞后必须重组到受体的DNA中。RNA不可能引入目标基因。

事实上,实际上存在转移RNA的基因工程,如RNA干扰技术所示,该技术用于沉默基因使其不表达。

Rna干扰

SiRNA是合成的,从公司买的,可以直接用于瞬时转染,用了就没了。优点是快捷方便。

ShRNA是基于质粒的。你需要克隆自己,一些公司出售这种产品,但价格比克隆自己贵得多。

因为是质粒,可以不受限制的扩增,总有一天不会用完。

质粒的转染效率与siRNA相似,但shRNA的表达需要时间,因此效果可能不如siRNA直接。

然而,shRNA质粒通常含有抗生素选择基因,这使您可以筛选稳定的细胞系,但这需要很长时间(1-3个月)

但是一旦成功筛选出稳定的细胞系,就不需要再做转染实验了,一劳永逸。

所以两者各有所长,取决于你的实验性质。

如果只是数据补充,果断使用siRNA。如果建立稳定的细胞体系后有很多实验,建议使用shRNA。

关于医学研究中混淆概念解释的SiRNA文章;

虽然siRNA和shRNA都是干扰RNA类型,但它们非常不同。SiRNA是一种单链RNA干扰,它通过与mRNA结合来阻止蛋白质表达。ShRNA实际上是一种病毒,它被整合到基因组中进行基因干扰。因此,siRNA和shRNA之间最大的区别在于它是否整合到基因组中以及转染效率的长短。两者的转染效率没有具体差异。

双通道阻滞剂和siRNA的区别。有些实验会使用通路阻滞剂,如akt通路阻滞剂。

LY294002,一些教师还使用siRNA来阻断Akt的激活。两者有什么区别?最大的区别是阻断剂影响蛋白质的活性(如乙酰化、磷酸化和泛素化激活);而siRNA直接降低蛋白质表达。因此,当细胞需要某些蛋白质时,最好的方法是用阻断剂代替siRNA,因为蛋白质表达的减少可能会导致额外的阳性结果。

3 siRNA和非编码RNA。SiRNA不是非编码RNA类型,而是与mRNA互补的RNA单链。非编码RNA是细胞内不具有基因编辑功能的RNA的总称。SiRNA可能会影响非编码RNA的稳定性,非编码RNA不能被siRNA抑制和下调。

rna干扰作用时间

胸苷合成酶抑制剂是尿嘧啶5位氢被氟取代的衍生物。5-FU在细胞中转化为5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸(5F-dUMP),它抑制脱氧胸苷酸合酶并阻止脱氧尿苷酸(dUMP)的甲基化转化为脱氧胸苷酸(dTMP),从而影响DNA合成。

此外,5-FU可以在体内转化为5-氟尿嘧啶核苷,并作为假代谢物混入RNA中,干扰蛋白质的合成,因此对其他细胞也有影响。

RNA干扰的特点

由于进化的机制,细胞有一套降解双链RNA(抗病毒感染)的酶系统。RNAi利用该系统人工引入与目标RNA互补的序列,从而在细胞中形成双链RNA并诱导降解机制。目标RNA被降解,无法进一步翻译。

RNA干扰机制

DNA干扰是指通过一定的手段对基因进行调控。RNA干扰是由小的单链RNA降解转录后mRNA引起的基因沉默效应。

与体内基因相同的DNA序列可以特异性地抑制细胞中目标基因的表达,这被称为DNA干扰(DNAi)。DNAi是在具有转录后基因沉默现象的烟草属植物中发现的,然后在一些动物、植物及其细胞中发现的。DNAi现象也存在于原核生物中。

rna干扰作用持续时间

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导并涉及特定酶的特异性基因沉默现象,通过阻断特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。RNAi是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子插入和调节基因表达的监测机制。目前,RNAi也广泛应用于分子生物学中基因功能的研究。

作用机理

RNAi的作用机制包括三个阶段:初始阶段、执行阶段和增殖阶段,其中增殖阶段只存在于植物中。

1.初始阶段-小双链RNA分子生成

外源性长双链RNA被Dicer酶特异性识别,并以ATP依赖的方式逐渐切割形成长度约20个核苷酸的双链siRNA,每条链的3’端有2个突出碱基。Dicer酶是一种多功能酶,可以识别dsRNA并通过其RNA结合结构域与其结合。去溶解dsRNA并以序列特异性的方式切割它。

2.实施阶段

靶mRNA降解或转录抑制引起的基因特异性失活和剪切形成的SiRNA与酶复合物RISC结合形成siRNA诱导沉默复合物(siRISC),然后导致靶RNA降解。

RNA干扰是什么

当然可以。

RNA具有双链结构,类似于DNA。双链RNA一般缩写为dsRNA。

Rna不仅具有双链结构,而且三条链混合在一起。它们部分形成特定的结构并发挥特定的作用。

一些病毒中的遗传物质是双链RNA。此外,几年前获得诺贝尔奖的RNA干扰技术(RNAi)必须由双链RNA触发。

rna干扰的意义

常见的RNA干扰方法的优缺点如下:

(1)dsRNA的化学合成:

优点:快速,通常您可以在6-8天内从供应商处获得定制的RNA oligo。

缺点:价格高,定制周期长。

(2)体外转录dsRNA:

优点:价格相对较低。

缺点:操作困难费时。

(3)通过3)PCR制备编码shRNA的转录DNA:

优点:经济快捷。

缺点:很难将这种dsDNA引入细胞。

rna干扰作用机制

RNAi是由双链RNA诱导的基因沉默现象,也称为转录后基因沉默(PTGS)。在细胞质中,双链RNA与RISC结合形成复合物,成为单链活性状态。然后它与互补的mRNA结合,引起mRNA的降解,从而下调相应的蛋白质表达水平。

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